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| Titel: | Moderne molekulare Diagnostikmethoden: Ultraschnelle Ad-Hoc-Pathotypisierung und Charakterisierung von AIV-Gesamtgenomen |
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| Titel (englisch): | Modern molecular diagnostic methods: ultrarapid ad hoc pathotyping and characterisation of AIV complete genomes |
| Beschreibung (dt.): | AIV-Isolate werden nicht nur verschiedenen Subtypen, sondern auch zwei Pathotypen (niedrig pathogen = LPAI; hoch pathogen = HPAI) zugeordnet. Nur HPAI-Viren können Geflügelpest auslösen und nur HPAI H5N1 weist ein humanpathogenes Potential auf. Für AIV ist dabei insbesondere die Sequenz der Hämagglutinin-Spaltstelle entscheidend und eine Sequenzanalyse ist zur Klassifizierung notwendig. Ziel des Projektes ist die Etablierung eines Verfahrens, das auf Basis einer hochdurchsatzfähigen massenspektrometrischen Analyse sehr schnell die Bestimmung des vorliegenden Serotyps und die Zuordnung zu einem bestimmten Pathotyp erlaubt. Für die Analyse anderer Genomabschnitte (z.B. einzelne Aminosäureaustausche, phylogenetische Untersuchungen im Rahmen einer molekularen Epidemiologie), aber auch Interspezies-Transmission, sind zudem schnelle Vergleiche von Gesamtgenomsequenzen unerlässlich. Die DNS-Sequenzierung mit ultrahohem Durchsatz mit Hilfe der neuen Technik des Genome Sequencer 20 (Roche), soll für die AIV-Diagnostik und Charakterisierung weiterentwickelt und validiert werden. |
| Beschreibung (engl.): | AIV isolates are not only classified into different subtypes, but also into two pathotypes (low pathogenic = LPAI; high pathogenic = HPAI). Only HPAI viruses can cause fowl plague and only HPAI H5N1 has a human pathogenic potential. For AIV, the haemagglutinin cleavage site is of special importance and to classify the pathogen a sequence analysis is requiered. The aim of the project is the determination of serotypes (e.g. H5, H7) and pathotypes of AIV isolates by high-throughput mass spectrometric analysis. For analysis of other genome sections (e.g. individual aminoacid exchanges, phylogenetic investigations within the framework of molecular epidemiology) and interspecies transmission, a rapid comparison of entire genome sequences is indispensable. Ultra-high-throughput DNA sequencing using the new technique of the Genome Sequencer 20 (Roche) will be improved and validated for the new application fields in AIV diagnostics and characterisation. |
| Ergebnis (dt.): | In dem Projekt wurde ein Impfstoff entwickelt, der Mäuse vor einer WNV-Infektion schützt und die Grundlage bildet für weitere Entwicklungen für die Veterinär- und Humanmedizin. Hierbei wurden die Techniken der DNA-Vakzinierung und Protein-Impfungen angewandt. Nukleinsäuren, welche für strukturelle Proteine von WNV kodieren, wurden in speziell für DNA-Vakzinen entwickelte und optimierte Plasmide eingebaut. Ein Impfplasmid konnte entwickelt werden, welches erfolgreich in Protektionsstudien eingesetzt wurde. Darüber hinaus wurden neuartige Nanopartikel zum Einbringen von Impfplasmiden in Zellen etabliert. Diese bestehen aus einem kationischen Polymer und aus körpereigenen Proteinen und zeigen keine toxischen Nebenwirkungen. Außerdem wurden micro-RNAs, kleine RNA-Moleküle, auf ihre Eignung als Biomarker für eine WNV-Infektion getestet. In einem dritten Projektteil wurden epidemiologische Untersuchungen an Tupfer- und Organproben von fast 2000 Vögeln in Deutschland durchgeführt. Während der Projektlaufzeit wurde kein WNV-Genom im Untersuchungsgebiet nachgewiesen. Dies deutet darauf hin, dass WNV noch nicht in Deutschland angekommen ist. |
| Ergebnis (engl.): | During the project a vaccine candidate was developed which is capable to fully protect mice from a West-Nile Virus (WNV) infection and forms the basis for further development in veterinary and human medicine. Major components of this vaccine are a DNA-plasmid and recombinant protein. Nucleic acids coding for structural proteins of WNV were inserted into specially engineered DNA plasmids. By doing so, a DNA vaccine was established which could be used successfully in protection studies. Functional nanoparticles were developed for the efficient delivery of DNA molecules into live cells. These particles consist of a cationic polymer and body-own proteins. They show no side-toxicity in vitro. In addition, micro-RNAs, small non-coding RNAs, were tested to serve as a biomarker for WNV infections. In a third part of the project, epidemiological studies were carried out to look for WNV-genomes in birds in Germany. To this end, cloacal swaps were collected and analyzed by methods for the detection of RNA. During the course of the project, no evidence for WNV circulation in Germany was obtained. |
| Laufzeit: | Beginn: 01.09.2006 / Ende: 31.08.2009 |
| Ausf. Einrichtung: | Friedrich-Loeffler-Institut Bundesforschungsinstitut für Tiergesundheit - Institut für Virusdiagnostik und Institut für Molekularbiologie, Greifswald |
| Themenfelder: | Tiergesundheit, animal health |
| Förderprogramme: | Programm zur Innovationsförderung des Bundesministeriums für Ernährung und Landwirtschaft |
| Schlagworte: | Virologie, Virology, Diagnostik, diagnostics, Geflügel, poultry, Wildtiere, wildlife, Zoonosen, zoonosis |
| Förderkennzeichen: | 2813100206 |
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Weizen Stroh
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+Weizen -Gerste
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Weizen*
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"Kleegras und Grünland"
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Beachten Sie, dass die (")-Anführungszeichen, die die Phrase umschließen, Operatorzeichen sind, die der Trennung der Phrase dienen. Es handelt sich hierbei nicht um Anführungszeichen, die den Such-String selbst umfassen.
